摘要：综述了近几年来国内外蜂蜜中氯霉素残留检测方法。着重介绍了高效液相色谱法、毛细管电泳法、酶联免疫法、色/质联用分析法以及生物传感器法，并分别综述了各种方法的优势与不足，最后展望了蜂蜜中氯霉素残留检测的发展趋势。
关键词：蜂蜜；氯霉素；残留；高效液相色谱法；毛细管电泳法；酶联免疫法；色／质联用分析法；生物传感器法
近年来，国内外发展起来的蜂蜜中氯霉素残留量检测方法有液相色谱法、毛细管电泳法、免疫分析法、色谱／质谱联用法等。现对这些检测方法作一介绍。
1高效液相色谱法
高效液相色谱法HPLC是将一定极性的单一或混合溶剂作为流动相，用泵将流动相注入装有填充剂的色谱柱内，注入的供试品被流动相带入柱内进行分离，各成分先后进入检测器，用记录仪或数据处理装置记录色谱图和进行数据处理，得出测定结果。
1982年JuergensU使用HPLC分析蜂蜜中氯霉素和磺胺噻唑残留。1994年胡大晰等应用HPLC定量分析出口蜂蜜中氯霉素残留量，样品用去离子水溶解后，经1-X8吸附树脂柱净化和富集，在WatersC18柱上分离，紫外测定。检测限为0.01μg/g，回收率为86.37％～101.5%。
日本2002年对进出口蜂蜜中氯霉素的检测是先把蜂蜜中氯霉素用0asisHLB固相萃取小柱精制后，用乙酸乙酯提取，硅胶柱精制，再用HPLC和紫外检测器进行测定，检测限为0.10mg/kg。2005年Moise.A等也是采用HPLC对来自罗马尼亚不同地区的10个蜂蜜样品中氯霉素进行残留分析。
HPLC虽然分离效率高，速度快，但仪器昂贵，样品需要前处理，操作人员需要进行严格的培训，并且最低检测限较高，无法满足当前对氯霉素低残留量的检测要求。2毛细管电泳法
毛细管电泳法也称为高效毛细管电泳法，是近几年来迅速发展起来的一种分离分析技术，是在毛细管中利用带电组分在高电场中迁移率不同而进行分离的，其显著特点是高效、快速和微量。
2001年，陈天豹等用此法结合二级管阵列紫外检测器对蜂蜜中残留的氯霉素进行定量分析，氯霉素的检测限为10μg/L，回收率大于89.6％。
此法虽然不需要复杂的抽提和净化程序，具有简单、柱效高、分离速度快、样品用量少、分析成本低等优点，但最低检测限仍然较高，无法满足当前对氯霉素低残留量的检测要求。
3酶联免疫分析法
氯霉素定量酶联免疫检测法是利用抗体与抗原间免疫化学反应，酶标氯霉素结合体与样品检体中氯霉素残留物同时竞争固定在酶标子L的氯霉素抗体，待检体中氯霉素的含量愈高，显色反应愈浅，待检体中氯霉素的含量愈低，显色反应愈深。再加入终止液，用酶标仪测标准品和样品检体吸光值，吸光值与样品检体中氯霉素浓度成反比。
2004年刘堃等采用辣根过氧化物酶与氯霉素结合作为酶标氯霉素进行反应，其检测灵敏度为0.3μg／kg。随着研究工作的深入发展已有测定氯霉素的试剂盒投放市场，但蒋宏伟等使用荷兰生产的EUSA试剂盒进行监测，氯霉素的检测限为0.02ng/g。
HAOYuShen等采用的是由r-Biopharm公司提供的试剂盒，检出限为0.30μg/kg。而G.ScoKichini等用由Euro-DiaposticaB.V提供的试剂盒进行EUSA定性筛选，蜂蜜的检测力小于0.30μg/kg。
酶联免疫法具有简单、快速、处理样品量大、灵敏度较高、特异性强等诸多优点，适合于现场筛选。但ELISA中可发生多种非特异吸附作用，其主要的非特异反应是由于抗体反应体系选择不当所致，不合适的抗体反应体系引起的非特异反应可导致EHSA出现假附性结果，并且只作为阴性确认，其结果若为附性，还需用GC／MS进一步确认。
4色／质联用分析法
4.1气相色谱—质谱联用法
气相色谱是一种公认的快速、高效的分离技术，特别适合于复杂混合物的分离。由于它只是利用保留时间作为鉴定手段，要对分离出来的每个组分做出明确鉴定是困难的。而质谱法是一种重要的定性鉴定和结构分析方法，对复杂的有机化合物具有很高的鉴别能力，是一种高灵敏度、高效的定性分析工具，它与许多用于定性分析仪器一样，没有分离能力，不能直接分析化合物。二者结合起来，将色谱仪作为质谱仪的进样和分析系统，把质谱仪作为色谱仪的检测器，将充分发挥色谱和质谱各自的优点。
迂君、刘宜孜等都报道了先经固相萃取后再采用GC—MS测定蜂蜜中的氯霉素残留量，并且所选用的离子源都是化学电离源(CI)。其中迂君等所选用的是正化学电离源，其检出限仅为20ng/mL，而刘宜孜、王建华、陈朝方均选用的是负化学电离源(NCl)，得到的相应检出限分别为0.1μg/kg，0.1μg/kg，0.5μg/kg。
HAoYuShen等分别采用气相色谱—质谱—电子轰击离子源—选择离子监控器(GC-MS-EI-SIM)，气相色谱质谱—负化学电离源—选择离子监控器(GCMS-NCI-SIM)对包括海洋食品、肉类、蜂蜜等10种基质中的氯霉素进行筛选检测，两种分析方法所得到的检出限分别为1.0μg/kg和0.1μg/kg，添加浓度下，回收率均为75％～120％。
对于氯霉素来说，负离子的CI质谱图灵敏度要比其正离子的CI质谱图高2～3个数量级，所以质谱仪选用NCI的灵敏度更高，干扰更少。本法结合了气相色谱分离特性强和质谱仪良好的定性能力，使分离、定量和定性同时进行。但是它的局限性在于只适合于分析可以气化的样品。
4.2液相色谱—质谱联用
高效液相色谱(HPLC)具有高分离能力和高分析速度等优点，是复杂混合物分离的主要手段。但是，由于HPLC本身在进行定性分析时的主要依据是保留值，缺乏有用的结构信息，因而它很难以对复杂未知混合物进行定性分析。相反，质谱(MS)具有很强的结构鉴定能力，但却不具备分离能力，因而不能直接用于复杂混合物的鉴定。把HPLC和MS有机结合起来的联用技术，由于结合了两者的长处，是复杂化合物分析的有效手段。在HPLc-Ms联用系统中，HPLc相当于谱学方法的分离和进样装置，Ms则相当于色谱仪的检测器。在此基础上还发展了串联质谱(Ms-Ms)，该法具有快速，高灵敏度和高专一性等特点，不受化学噪声的干扰。
2003年L.verzegnassi等用液相色谱—电喷雾串联质谱法分析了来自阿根廷、澳大利亚、古巴、中国的蜂蜜中氯霉素残留量，检出限和检测力都低于0.1μg/kg。
2004年A.F.Forti等先将蜂蜜溶解于水，用二氯甲烷与丙酮的混合物进行萃取，以C18柱净化，采用电喷雾电离负离子模式，用LC-MS／MS检测，检出限为0.07μg/kg，回收率为98.7％～102.0％。
2005年Kannan.V等用此法对商品蜜中氯霉素残留量进行检测，检出限为0.05ng/g。Anton.KF等用高效液相色谱和质谱检测器相结合的方法检测蜂蜜中氯霉素，但由于其采用了sub-2μmparticulate高效液相色谱柱，灵敏度更高，分离速度更快(4.2min)，检测限可达到0.007μg/kg的效果。
谢文等在蜂蜜样品中添加同位素内标氯霉素-d5，经乙酸乙酯提取，自制硅胶柱和OasisHLB小柱净化后用高效液相色谱—电喷雾电离质谱检测，检出限为0.1μg/kg，相对标准偏差小于10％。
Kristin.E等报道了用液相色谱与质谱联用的方法对肉、海洋食品、蛋、蜂蜜、牛奶、血浆和尿中氯霉素残留检测，检出限为0.02μg/kg。
lshiiR等报道液相色谱串联质谱分析蜂蜜与王浆中的氯霉素，在液相色谱分离中采用MightylRP-18GP柱，以醋酸铵—乙腈为流动相，再用水稀释，OasisHLB柱净化送人质谱检测，氯霉素定量限为0.3ng/g，在定量限的回收率高于92％。
陈舒舒等建立了反相高效液相色谱—离子阱质谱法检测蜂蜜中氯霉素残留的方法，其前处理采用的是QuEchERS方法进行快速提取与净化，定性定量分析采用的是电喷雾电离法(ESl)负离子模式、多反应离子检测器(MRM)，该法检出限为0.1μg/kg，添加回收率水平在78％～93％间。
可见液相色谱—质谱联用得到氯霉素检测限一般为0.007～0.100μg/kg，能得到很高的灵敏度，并且分离和定性定量能力强，值得在蜂蜜氯霉素残留检测中推广应用。
5生物传感器法
生物传感器(biosensors)又称生物电极(bioelectrodes)，是近年来才发展起来的一类应用生物反应的新型传感器，它是利用生物的或有生命物质分子的识别功能与信号转换器相结合，将生物反应所引起的化学、物理变化变换成电信号、光信号等。
2004年JulieF等就报道了用表面等离共振生物传感器与Qnexo氯霉素试剂盒检测家禽肉、蜂蜜、对虾和牛奶中氯霉素与氯霉素葡糖醛酸残留，蜂蜜样品需先用乙酸乙酯苹取，然后表面等离子体共振对其中氯霉素与氯霉素葡糖醛酸残留进行免疫化学筛选，在传感器芯片上涂上氯霉素衍生物和抗体进行测定，检出限为0.02μg/kg，检测力为0.02μg/kg。
与传统仪器相比生物传感器成本更低，检测精确度高，检测判读时间短，但传感器的稳定性很难控制，在应用中会经常碰到传感器输出信号的稳定性问题，使得构建成的测定系统转化成商品，由用户来实现测定十分困难。
6结语
以上所述对氯霉素残留检测方法中，酶联免疫法具有特异、灵敏、快速、仪器简单等优点，能在短短的几个小时检测几十到上百个试样，可以实现采样现场的适时决速检测，非常适合对氯霉素残留筛选的需要。而高效液相色谱与质谱联用法具有精确可靠、灵敏度高、重复性好以及假阳性少等优点，只要选择出前处理条件和色谱、质谱条件，就能得到较满意的结果，非常适合于实验室进行科学研究。湖北天马养蜂场，加我们的微信一起学养蜂。
预计今后，氯霉素残留检测技术主要是在这两个方面上发展和完善。而有了检测结果的技术支撑，将为卫生监督机构提供强有力的依法行政依据，以期协助国家提高蜂产品质量。
引自《蜜蜂杂志》2007（8）