蜂王浆中王浆酸(10-HDA)的研究进展

发布时间:2014-10-28 09:46    文章来源:湖北天马养蜂场    浏览量:880 次    【字体大小:正常 偏大 最大

王浆酸可以说是判断蜂王浆质量的主要依据。大多数研究表,10-HDA具有重要的生理功能,而且在自然界中为蜂王浆所特有,所以一直以来被作为衡量蜂王浆质量及辨别其真伪的重要指标。

1、蜂王浆中10-HDA的来源、结构、性质及功能

1.1王浆酸来源

10-羟基-2-癸烯酸是由德国科学家D.J.朗格(1921)首次在工蜂上额腺中发现的,鬼子学者佐藤道夫也以大量数据证实,10-HDA主要分泌于工蜂的上颚腺。刚出房的工蜂上颚腺中10-HDA含量极微,随着日龄的增加,含量有增加的趋势,15~20日龄哺育蜂的上颚腺中含量最高,20日龄以后开始有降低的趋势,10-HDA含量的增加与青年哺育蜂分泌蜂王浆有关,在蜂群大繁殖期含量极高,而外勤蜂上颚腺中的10-HDA含量则极低。1957年Batendt首先报导从王浆中分离出10-HDA,至今还未在自然界其他物质中发现此化合物,所以10-HDA通常又被称为王浆酸。

1.2王浆酸性质

10-HDA是王浆中很重要的一种脂肪酸,占总脂肪酸的50%,在王浆中的含量也相对恒定,约为1.8%左右。常温时为白色晶体,性质稳定,在室温或高温下长时间存放时,结构不会被破坏或完全消失。易溶于甲醇、乙醇、氯仿、乙醚,微溶于丙酮,难溶于水,熔点为64℃。可以比较容易地从蜂王浆中将其分离出来,也可进行人工合成。

蜂王浆中王浆酸(10-HDA)的研究进展

1.3王浆酸功能

大多数研究表,10-HDA具有重要的生理功能,而且在自然界中为蜂王浆所特有,所以一直以来被作为衡量蜂王浆质量及辨别其真伪的重要指标。但是,1981年鬼子琦玉养蜂株式会社的技术人员通过试验发现,在蜂王浆已全部炭化的高温条件下,王浆酸的残余率竟高达90%以上,这个事实证明了王浆酸很稳定,也让人们对10-HDA能否作为蜂王浆的质量指标开始产生质疑。相关试验证明,无论贮藏条件如何,即使蜂王浆已经变质,其中的10-HDA含量都不会改变,显然,它不适合作为蜂王浆品质的敏感指标,另外,虽然10-HDA为蜂王浆所特有,但是也可以通过很多方法进行人工合成,所以把10-HDA作为衡量蜂王浆品质优劣及是否掺假的特征指标是不恰当的。

但目前世界上很多国家仍将10-HDA作为蜂王浆的主要质量指标,尤其在出口方面,往往以其含量高低作为蜂王浆优劣和定价的关键。建立和改进蜂王浆中10-HDA含量的测定方法一直是研究内容之一。

2、蜂王浆中王浆酸(10-HDA)的测定方法

迄今为止已经建立了很多种测定10-HDA的方法,包括薄层扫描法、气相色谱法、高效液相色谱法、分光光度法、酸度转换法、毛细管等速电泳法、红外光谱法和气相色谱-质谱联用法。上述测定方法在实际应用中各有优缺点,刘放等人曾先后对其中的一些方法进行了分析和比较。随着色谱技术和其他相关技术的发展,原来的测定方法不断被改进和优化,如分光光度法、色谱法等,同时许多新方法相继被提出,如酶联免疫吸附法、GC-MS法等。

2.1分光光度法

包括紫外分光光度法、薄层层析-紫外分光光度法、聚酰胺薄膜层析-分光光度法、二阶导数分光光度法、红外分光光度法。对该方法研究最多的是样品前处理的改进及最佳波长的选定。赵静报道的三波长-紫外光谱法通过消除干扰因素,使传统紫外光谱法导致测定结果偏高的问题得到了改善问。近年来出现的许多新的分光光度法,如示差分光光度法和一阶导数分光光度法,样品无需事先分离就能消除共有组分的干扰,测定快速简便,是应用较广的分析方法之一。

2.2色谱法

包括薄层色谱法、气相色谱法、高效液相色谱法、胶束电动毛细管色谱法。几种色谱测定法中,气相色谱法须进行硅烷化或甲酯化处理,操作较为繁琐。薄层色谱法易受试验环境等多种因素的影响,方法重现性差,故以高效液相色谱法较为理想。由于它具有操作较简便、省时,结果灵敏、准确等优点,所以仍然是目前王浆酸定量分析中研究最多且有着广泛应用前景的测定方法。色谱法的研究重点是供试样品的准备、色谱条件的优化、流动相及固定相的选择。值得一提的是刘满仓等人用自行合成的乙烯基交联氨基键合固定相建立了不经分离、只需稀释就可进样定量分析蜂王浆中10-HDA的高效液相色谱方法,使10-HDA的测定变得更加准确而简便。孙保国等建立的胶束电动毛细管色谱法用内标法定量测定10-HDA,不但快速简便,而且消除了其它脂肪酸的干扰,检测成本也比HPLC法低很多。

2.3酶联免疫吸附法(EUSA)

免疫学检测技术是70年代发展起来的新技术,潘荣生等人将其引用到10-HDA的检测中,主要原理是将10-HDA结构中一端原有的羧基通过化学修饰的方式加以保护,将另一端的经基与琥珀酸酐反应,连接一个带有羟基的桥,用混合酸酐法将10-HDA与载体蛋白偶联,制备得到10-HDA,人工合成免疫原。抑制试验显示其检测范围在7.812~250ug/g之间。对照试验表明,用该法检测的结果与液相色谱法的符合率为91%以上。ELISA的应用,为检测机构和基层单位提供了一个简便、快速、准确的10-HDA测定方法。更多养蜂技术和蜂产品知识请关注湖北天马养蜂场官方微信公众号:"honeymarket",或者加QQ号2969169050,欢迎投稿和交流讨论蜜蜂文化。

2.4气相色谱-质谱联用法(GC-MS)

该方法选用DB-17石英毛细管柱,采用色谱柱程序升温,利用毛细管不分流进样及其溶剂效应技术,并应用气相色谱-质谱选择离子测定方式来进行测定。在试验过程中,首先用10-HDA标准溶液通过全扫描方式做出总离子流图,然后根据其质谱图中的碎片离子针对各种样品进行选择离子测定方式的选择试验,最后确定73,86,124amu碎片离子作为定量的特征目标监测离子。应用气相色谱-质谱选择离子测定方式具有灵敏度高、选择性好和抗干扰的特点。

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